فلورسئین به صورت موضعی برای اندازگیری فشار سطح محدب چشم، پیدا کردن ضایعات سطح چشم، تعیین محل زخم و اجسام خارجی در چشم، انجام آزمون نشت اشک و آزمون های نشت زخم چشم، و قرار دادن لنز سخت به کار می رود. همچنین به صورت تزریق داخل وریدی و به عنوان ماده کمکی در آنژیوگرافی شبکیه چشم، ارزیابی عروق عنبیه، معاینه ته چشم، تشخیص بافتهای مرده و تومورهایمختلف چشم، تعیین زمان گردش خون چشم و مشاهده جریان مایع داخل چشم مصرف می شود.